使用检测试剂盒进行试验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制试验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验结果的准确性。有时本底较高,说明有非特异性反应。
  在检测试剂盒中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包括:
  固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯yixi、聚苯yixi、聚丙酰胺和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。目前常用的是40孔聚苯yixi凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
  包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。蛋白质包被的适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它试验条件相同时,观察阳性标本的OD值。选择OD值大而蛋白量少的浓度。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml。
  检测试剂盒使用的注意事项:
  1.本试剂盒仅适用于对猪血清或血浆中猪瘟病毒抗体的检测,不能用于其他畜类样品的检测。所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按传染物处理。
  2.试剂盒保存于2-8℃,使用前整套试剂应平衡至室温。
  3.试剂开封后如未用完,板条应和干燥剂一起放入自封袋内密封2-8℃保存,一周内使用,其它液体组份使用后瓶盖应拧紧置2-8℃保存,一周内使用。
  4.检测时必须设置空白对照(只加显色剂和终止液,不加酶标结合物),并在结果分析时,单波长测定应扣除空白值,双波长测定不应扣除空白值。
  5.注意控制反应时间,温育30分钟应控制在30±2分钟内,温育10分钟应控制在10±1分钟内,避免因反应时间缩短或延长而造成整体显色降低或升高。
  6.试剂过期不得使用,不同批号的试剂盒中的组份不得混用,封板膜不得重复使用,试剂瓶盖切勿交叉使用。