常温细胞收货当天处理方式
1.收到常温细胞后,及时拍照记录有无漏液瓶身破损现象。
2.镜下观察有无微生物污染现象拍照记录不同倍数镜下细胞状态和有无染菌现象,方便后续售后处理。
3.消毒后,更换赠送的完全培养液放置培养箱静止2.3小时。如细胞有多数悬浮细胞需要高心收集重新接种止培养瓶。
4.观察细胞密度若超过80%则可正常传代处理(有的原代细胞不可传代。请根据实际情况决定),初次传代推荐比例1:2到:(按实际收货细
胞密度决定,若不确定可联系技术支持)若细胞密度不到80%则可继续培养,注意拧松瓶盖或更换透气瓶盖;悬浮细胞注意离心所有培养基
以收集细胞。
5.由于气温运输等影响造成贴壁细胞漂浮的.请将细胞离心收集后在离心管中消化后进行传代,或及时联系技术支持进行指导传代。
6.该细胞对培养基及血清的质量要求较高,其中任何-一个质量不好都会导致后续培养过程中细胞的分化,特别是传3、4代以后细胞容易出
现分化,细胞变大贴壁较紧呈典型”摊鸡蛋”样;
7.该细胞在传代或复苏后,刚贴壁时会有短小的突触,但细胞胞体还是呈圆形或近圆形待细胞培养23天后,短小突触会消失;
8.如果用胰酶消化经验不足时,极易导致后续细胞形态的改变也不容易将细胞消化下来,
9.如果用细胞刮将细胞刮下来容易导致大量细胞死亡和细胞形态的改变也不容易分散为单细胞;
10该细胞不管在任何密度下腰是更换了新鲜培养基后紧接着进行吹打细胞会很难从培养瓶壁,上脱落。
推荐的传代方法有以下两种:
方法一该细胞在细胞密度较大.培养基较黄时,不要去除旧培养基用移液管直接对培养瓶壁上的细胞进行吹打使细胞从壁上脱落。细胞
脱落后可加入新鲜的完全培养基混匀后分瓶也可收集培养瓶中的细胞悬液,离心后,弃上清再用新鲜的完全培养基重悬细胞后分瓶,进行
培养。这种方法容易出现的问题是如果操作者经验不足可能导致部分细胞无法脱落。
方法二细胞密度达到80-90%,需要进行传代时可在培养瓶中的原培养基中滴加1- 2滴无菌的HEPES缓沖液视培养瓶中培养基的体积适
当可以增加HEPES*的用量)作用1-492min,使培养基PH变酸培养基颜色变黄,直接用移液管进行吹打这时细胞会很轻易脱落并成单细
胞。细胞脱落后可加入新鲜的完全培养基混匀后分瓶;也可收集培养瓶中的细胞悬液高心后,弃上清,再用新鲜的完全培养基重悬细胞后
分瓶进行培养。