细胞的冻存方法:
1.细胞:选对数生长期细胞,收集细胞24小时前换液一次。
2.计数:按常规方法把细胞制成细胞悬液计数。令细胞密度达5x106/ml,离心去上清吸入离心管中。
3.冻存液:先用培养液9分+DMSO 1分(或甘油)配成10%的DMSO冻存液按上法-滴滴加入离心管中然后用吸管轻轻吹打令细胞重悬。
4.分装:分装入无菌安剖中每安剖加1.5毫升细胞悬液。
5.封口:用塑料安剖时拧紧瓶口即可;如用火焰封闭安剖口后仔细检查定要封严必要时可浸入蓝色液中观察为安全起见把安剖缝入纱布小
袋中,以防液氮浸入后融解时因受热发生爆炸伤人纱袋一端系以线绳 末端扎有小牌,注明细胞名称:冻存日期以便日后查找。
细胞复苏的方法:
1从液氮罐中取出安剖有时因安剖未封严浸入了液氮。取出后因安剖内液氮迅速气化而发生爆炸,因此应带有防护眼睛和手套。
2.迅速放入盛有36C-370水的搪瓷罐中扣上盖并不时摇动尽快解冻。
3.剪开纱布口袋取出安剖用70%酒精擦拭消毒后净化台上打开盖,用吸管吸出细胞悬液装入离心管中,再补加10m1培养液吹打使细胞悬
浮。
4.低速离心(500-1000转分)5分钟取上清后再重复用培养液漂洗、离心。

5.加入培养液适当稀释后,再移装入培养瓶中,置温箱培养,次日更换一次培养液后再继续培养。

注意事项:
1.收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好。培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。
2.产品仅供科研先不开瓶盖瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时(4h左右).稳定细胞状态切忌在温箱内静置过夜。
3.静置后镜检;拍照记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。
4.贴壁细胞:若细胞密度超过80%,可正常传代:若未超过80%,收集细胞瓶内的培养基留8ml继续培养至80%左右再传代瓶盖可稍微拧松。
5.细胞瓶内的培养基含血清和双抗,可收集后4C保存备用,可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基。一半用客户自备的

培养基,使细胞逐渐适应培养条件,以免因不适应而造成生长状态不佳。

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