Stachybotrys spp.葡萄状穗霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒-天津睿创生物科技有限公司

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Stachybotrys spp.葡萄状穗霉属通用探针法荧光定量PCR试剂盒

品牌：睿创

产地：中国

货号：RC-P61704R

价格： ￥3990/盒
发布日期： 2023-06-12
更新日期： 2024-11-09

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产地	中国
品牌	睿创
货号	RC-P61704R
用途	科研实验
包装规格	50次
是否进口	否

产品规格:50T
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。

样品 DNA 的制备
1.用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 DNA 提取试剂盒兼容。。也可以选购本公司的一管式病毒 DNAout 或其升级版柱式病毒 DNAout。本试剂盒免费赠送 15 次 DNA 病毒裂解液试用装(一管式病毒 DNAout 的成分)。
稀释阳性对照(以 10E2-10E7 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传-染-性-病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,只提供可以直接使用的长为 86bp 的 DNA 片段作为阳性对照。
2.标记 6 个离心管,分别为 7,6,5,4,3,2。
3.用带芯枪头分别加入 45 μL 模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4.在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡 1 分钟,得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。5.换枪头,在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡 1 分钟,得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6.换枪头,在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中,充分震荡 1 分钟,得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7.换枪头,在 4 号管中加 5 μL 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照到 4 号管中,得1×10E4 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。8.重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
PCR试剂盒设置 qPCR 反应(20 μL 体系,在样品制备室进行)
9.在 PCR 管中加入下列成分(待测样品需要做三次重复,下表只列出一次。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后*后加):
注:仅 ABI7500、7700 和 7900 仪器需要使用 ROX 作为对照,其他荧光 PCR 仪器 (如 iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000 和 LightCycler480)不需要使用 ROX,则用水替代。
10. 盖上盖子后上机,按下面参数进行 PCR(具体 PCR 参数可以根据仪器不同而自行
优化)。
过程温度时间
预变性95℃1 分钟
PCR 反应95℃15 秒
(30 个循环)60℃15 秒
72℃15 秒
11. 数据采集
具体操作按所用仪器推荐的流程进行。本产品中所含的荧光染料在不结合 DNA 时,
吸收光谱在 471 nm,结合 DNA 时的吸收光谱在 500 nm,发射光
谱在 530 nm。
四、数据处理
12. 以阳性对照浓度的 log 值为横轴,以 Ct 值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品
的 Ct 值从标准曲线上推算出样品 DNA 浓度的 log 值,再推算出其浓度。